质谱主机加装成像功能后实验周期会变长还是变短?
问:以前做液质分析从样品到数据半天就搞定,加装成像源之后做一个成像实验要多久?
从组织样品到出图,分成几个阶段。时间跨度跟你想达到的空间分辨率直接相关。
样品制备:从-80℃取组织到切好片放到ITO玻片上,熟练操作大概15-30分钟一个样品。这个时间跟切片数量成正比,多切几片预留备用会多花一些时间。
成像扫描:这是时间弹性最大的环节。一块10mm×10mm的切片,不同分辨率对应的扫描时间差距巨大:
200μm步长(2500像素)——大约10-20分钟
100μm步长(10000像素)——大约40-80分钟
50μm步长(40000像素)——大约2.5-5小时
20μm步长(250000像素)——大约15-30小时(通常分阶段做或者只扫子区域)
以上时间估算是按每个像素采一张全谱+喷雾稳定时间计算的。实际扫描速度跟你的质谱仪扫描速度和设置的谱图质量参数有关——谱图质量要求越高、每张谱采的时间越长,总时间就要往上加。
数据分析:数据出来之后做可视化分析的时间取决于你的分析目的。只是看一眼某几个m/z的分布图像,几分钟就搞定。如果要结合H&E染色做共定位分析、做PCA聚类、做统计分析,那就要半天到一天。
问:这么说做一次高分辨率成像实验要一整天?
接近。一个常见的工作流是:上午切好切片(1小时内),上机从低分辨率开始扫(半小时预览),确定感兴趣区域后设置高分辨扫描参数,然后挂机扫(可能一个下午甚至过夜),第二天上午来看数据、做分析。
有些课题组把成像扫描安排在周末或者夜间——参数设置好了,仪器自己跑,人在不在无所谓。
跟常规液质分析的"进样-等结果"模式相比,成像的分析节奏的确慢得多。但做一次成像得到的信息量也不是单次液质能比的——一个像素点就是一张全谱,一万个像素点的数据可以写好几篇论文了。回报率不是用"每个样品多少时间"来算的。
问:加装新策源的成像源会不会让整个流程变得更慢?
恰恰相反。加装方案在流程效率上有一个整机方案不具备的优势:你可以快速切换模式。
传统成像质谱仪是"成像专用机",你把它当液质用反而不方便。加装了成像源的质谱主机,可以在成像模式和常规分析模式之间灵活切换。上午可能还在跑常规液质样品,下午拆下常规离子源、装上成像源就能扫切片。切换熟练了十几分钟搞定,相当于一台仪器当两台用。
这在仪器资源紧张的高校和中小型实验室尤其关键——不需要专门为成像腾出一台昂贵的质谱仪。
问:扫描过程中能暂停、换样品再继续吗?
能。成像软件一般支持暂停当前扫描、换样品、继续扫描等功能,也支持设置多个样品排队扫描——晚上挂机跑三块切片,第二天上午全部收齐。实际操作上,记得在光谱文件命名里加上样品编号和扫描参数,不然回头看数据容易对不上是谁的切片、哪个参数扫的。
新策源(Neo Source INSTRUMENT)的MSI DPI和MSI LDPI成像源适配Agilent、AB SCIEX、Thermo品牌质谱仪。加装方案支持成像/常规模式快速切换,最大化利用现有仪器资源。